我们都知道，原代分离细胞培养实验是指从供体内取出组织后，经特殊步骤将其分离成单个细胞或单一型细胞群，然后我们再让原代细胞在体外模拟人体生理环境进行生长和繁殖。

那原代分离细胞培养实验操作步骤又是怎么样的呢，又有什么需要特别注意的呢？具体操作步骤如下：

原代分离细胞培养实验第一步：剪切组织

组织块取出来后，首先就得用D-Hanks液清洗掉组织上的血渍，并去除那些非培养所需的组织，记得一定去除后再次清洗，再接着用手术刀将组织切成若干个更小的组织块，然后放到加入了适量缓冲液烧杯中再次剪切组织直到糊状大小，静置一会后，吸掉上面那层液体再用缓冲液清洗。

原代分离细胞培养实验第二步：消化分离

前面已经将大的组织块剪切成很小了，这时就得将细小的组织块，继续用消化酶消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以便我们进一步的培养。

原代分离细胞培养实验第三步：培养

分离好了细胞那就需要培养了，细胞太多，我们得将细胞分装到多个培养瓶中，每个培养瓶中的细胞数可以按自己实验所需密度去定，然后将其放到37℃的5％CO2的培养箱内静置培养，放个3到5天就好了。

原代分离细胞培养实验中，有以下几个点需要注意：

原代分离细胞培养实验注意事项一：一定要记住无菌操作，预防污染；因为细菌或霉菌一旦受到污染，就将直接导致原代分离细胞培养实验失败。

原代分离细胞培养实验注意事项二：用的培养液必须满足细胞生存和生长的必要条件，不确定时，可做预实验；动物种类、组织类型不同，那对培养液的要求也就不同，不确定的，可做预实验来选择适当的培养液。

原代分离细胞培养实验注意事项三：消化分离后，静置培养，切忌随便移动；消化分离后，细胞一定要放到于CO2培养箱培养，而且要是绝对静置的状态，切忌别因为担心培养情况而动不动就取出培养瓶来看，这移动培养瓶，就容易使将使原代分离细胞难以贴壁，无法顺利培养。

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